Quels sont les 4 méthodes d’analyse les plus utilisés encore  exploration analytique en biochimie humaine ?

• Spectrophotométrie
• Chromatographie
• Immunodosage
• electrophorèse

Décrire le spectrophotomèrtre

Source > fente d’entrée > prisme > fente de sortie > échantillon > détecteur 

Quels sont les matériaux pouvants être utilisés pour la source de lumière du spectromètre ? Quel spectre diffusent-ils ?

• (W) Un filament de tungstene : visible (350nm à 700nm) 
• (H) Hydrogène ou Deutérium : UV (200 à 360nm) 
• (Xe) Xénon : UV + Visible (260 à 800 nm)
• Vapeur de mercure  

Quel spectre le filament de tungstene produit-il ?

Spectre lumineux dans le visible, de 350 à 700 nm 

La spectrophotométrie est-elle une méthode quantitative ou qualitative ?

Les deux 

A partir de quoi fait-on le blanc ? 

A partir du milieu réactionnel (solution dans laquelle se trouvera l’espèce) 

Comment est faite la gamme étalon ? 

Il s’agit d’un ensemble de solution préparée à partir de l’espèce à doser. On connait leur concentration contrairement à la solution de concentration mystère, et on a calculé leur absorbance. Avec C et A de ces étalons on a construit une droite d’étalonnage à laquelle se fier pour trouver la concentration à partir de A. 

Quels sont les formules de l’absorbance ? 

A = log (Io/I) = log (1/T) = Epsilon x L x C 

Avec L la largeur de la cuve

Qu’appelle-t-on la densité optique ? 

C’est l’autre nom de l’absorbance 

Expliquer la technique d’immunodosage du sandwich 

• Des anticorps Iaires sont placés en excès sur un support.
• L’espèce à doser, qui est un antigène, est introduite.
• Création d’un complexe immun à partir des Ac en excès et de l’antigène introduit.
• Lavage/elution pour éliminer les antigènes non associés 
• Ajout d’anticorps IIaires marqués, reconnaissants l’antigène sur un autre site.  
• Dosage par spectrophotométrie des marqueurs ou lecture sur plaque des fluorescences 

Quelle est la relation qui lie les anticorps marqués aux antigènes à doser lors de la technique sandwich ?

Les anticorps marqués IIaires auront une concentration proportionnelle aux antigènes à doser. 

Quels sont les marqueurs pouvants être utilisés dans le cas de l’immunodosage ? 

• Enzyme
• Traceurs radioactifs
• Molécules luminescentes
• Molécule fluorescente 

Expliquer la technique d’immunodosage par compétition

• Introduction d’anticorps en qté limitante sur un support
• Introduction des Ag à doser : une partie est marqué, l’autre ne l’est pas. Les marqués ont une concentration connues. 
• Elution pour retirer les Ag non liés
• Dosage des Ag marqués, qui sera inversement proportionnel au xAg non marqués donc à doser. 

Expliquer la chromatographie sur couche mince 

Elle concerne une relation hydrophobe/hydrophile

La phase stationnaire, hydrophobe ou hydrophile, est placée sur la couche mince.

L’espèce à séparer est placée sur la phase stationnaire, puis la couche mince est trempée dans la phase mobile, qui est hydrophobe ou hydrophile (inverse de la phase stationnaire)

La phase mobile emporte avec elle les molécules ayant la même affinité (soit hydrophobe, soit hydrophile comme elle). 

Expliquer quelles sont les étapes qui suivent une chromatographie échangeuse d’ions, une fois que l’élution finale a été faite.

On obtient une courbe avec le temps délution par espèce. 

On connait le temps d’élution de chaque espèce (on a des références), donc on sait en quelle quantité elles sont présente grâce à la mesure de l’aire sous la courbe correspondant à leur temps d’élution. 

Quelles sont les colorations de révélation possible dans le cas de l’éléctrophorèse ? 

- Ninhydrine 

- Bleu de coomassie

Quel gel est utilisé pour l’éléctrophorèse simple ? 

Agarose ou acétate de cellulose